Desenvolvimento de um radioimunoensaio de dexametasona no soro como subsídio para o diagnóstico da síndrome de Cushing / Development of serum dexamethasone radioimmunoassay to corroborate Cushing's syndrome diagnosis

INTRODUÇÃO: O teste de supressão com 1 mg de dexametasona (TSDx) é amplamente empregado no rastreamento da síndrome de Cushing (SC) dada sua elevada acurácia diagnóstica. A SC é um distúrbio endocrinometabólico resultante do hipercortisolismo crônico com característica de ausência de supressão do cortisol no TSDx. OBJETIVO: Desenvolver um radioimunoensaio (RIE) para a dosagem de dexametasona (Dx) no soro para complementar o TSDx. MÉTODOS: Foram imunizados três coelhos com o conjugado dexametasona-21-hemissuccinato-BSA para escolha do melhor anticorpo e o RIE foi desenvolvido de acordo com as recomendações da RE 899/2003 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA). Analisamos 96 voluntários, sendo 67 submetidos ao TSDx e 29 não, e 12 pacientes com SC, estudados na Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) e na Santa Casa de Misericórdia de São Paulo. RESULTADOS: O anticorpo contra Dx selecionado mostrou boa especificidade, coeficiente de variação (CV por cento) intra e interensaio < 20 por cento, exatidão de 93,8 por cento e dose mínima detectada de 19,5 ng/dl. A concentração de Dx no soro foi semelhante nos voluntários e pacientes com SC (ausência/supressão do cortisol): 205 a 703 ng/dl e 174 a 661 ng/dl (intervalo de confiança [IC] 95 por cento), respectivamente; os valores foram indetectáveis naqueles que não se submeteram ao teste. DISCUSSÃO: O anticorpo empregado apresenta boa afinidade e especificidade para quantificar a Dx no soro. O RIE mostrou reprodutibilidade e eficiência na determinação dos níveis séricos de Dx durante o TSDx. CONCLUSÃO: O presente RIE para a dosagem de Dx no soro é acurado e confiável, permitindo estabelecer uma faixa de referência de valores para subsidiar a interpretação do TSDx.

INTRODUCTION: The 1 mg dexamethasone suppression test (DxST) is widely used to screen Cushing's syndrome (CS) due to its high diagnostic accuracy. CS is an endocrine-metabolic disorder caused by hypercorticism, which is characterized by the absence of cortisol suppression in DxST. OBJECTIVE: To develop a radioimmunoassay (RIA) for the measurement of serum dexamethasone (Dx) to complement DxST. METHODS: Three rabbits were inoculated with dexamethasone-21-hemisuccinate-BSA in order to choose the best antibody. Serum Dx RIA was performed according to RE 899/2003 (Agência Nacional de Vigilância Sanitária [ANVISA]) regulations. Serum samples from 96 volunteers from Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) and Santa Casa de Misericórdia de São Paulo were analyzed, 67 of which were submitted to DxST and 29 were not. There were 12 patients with CS. RESULTS: The Dx antibody chosen showed good specificity. Intra- and interassay CV were < 20 percent with 93.8 percent accuracy and the lowest detection limit was 19.5 ng/dl. Serum Dx concentration was similar among both volunteers and CS patients (absence of cortisol suppression): 205 to 703 ng/dl and 174 to 661 ng/dl (95 percent CI), respectively. Values were undetectable among those that were not submitted to the test. Discussion: The anti-Dx antibody shows high specificity and reliability to quantify serum Dx in DxST. The Dx RIA presented reproducibility and reliability in the determination of serum Dx levels during DxST. CONCLUSION: The current RIA for serum Dx is accurate and reliable, which permits to establish a reference value range to substantiate DxST interpretation.

Análise critica de dois radioimunoensaios segmento-específico para a medida de paratormônio no diagnóstico de hiperparatiroidismo primário

Foram estudados os resultados obtidos com dois radioimunoensaios segmento-específicos para a medida de paratormônio sérico, um aminoterminal e outro carboxiterminal, em 29 pacientes com hiperparatiroidismo primário comprovado. Os resultados foram comparados com os observados em 69 indivíduos normais e em dez pacientes com hipercalcemia näo relacionada a hiperparatiroidismo primário. Analisando-se a capacidade de detecçäo de hiperparatiroidismo primário no universo de pacientes com hipercalcemia, o método aminoterminal específico mostrou sensibilidade de 82,8% e especificidade de 100%, enquanto que com o carboxiterminal obtivemos 59 e 70%, respectivamente. Os autores concluem que a medida do paratormônio, através de um ensaio específico para a porçäo biologicamente ativa (aminoterminal) é de maior valor diagnóstico, ressalvando-se a necessidade da dosagem concomitante da calcemia

Padronizaçäo das concentraçöes de esteróides no líquido amniótico: II. Testosterona, sulfato de deidroepiandrosterona e cortisol / Standardization of steroid concentrations in the amniotic fluid: II. Testosteroni, dehydroepiandrosterone sulfate and cortisol

As dosagens de testosterona, sulfato de deidroepiandrosterona (SDHEA) e cortisol no líquido amniótico (LA) permitem avaliar as funçöes das adrenais e das gônadas fetais. Estudamos LAs de 41 gestaçöes, obtidos por amniocentese no segundo trimestre da gestaçäo. Trinta e sete destas gestaçöes (das quais quatro de risco para hiperplasia adrenal congênita por deficiência da 21-hidroxilase) resultaram em fetos normais, três foram anencéfalos e um, portador de deficiência da 21-hidroxilase. Os esteróides foram dosados utilizando-se radioimunoensaio previamente descritos para dosagens séricas. Valores médios (ñ DP) destes esteróides no LA de gestaçöes com fetos normais foram testosterona: 76 ñ 34 ng/del; SDHEA: 22 ñ 9 ng/ml; cortisol 19 ñ 8 ng/ml. LAs de gestaçöes que resultaram em anencéfalos apresentaram concentraçöes de SDGEA e cortisol significativamente mais baixas em relaçäo aos normais. Testosterona foi mais baixa em fetos femininos quando comparados aos masculinos normais e discretamente mais elevada que o normal no feto feminino afetado.Näo houve diferença no valor destes esteróides ao compararmos LAs de fetos de risco para a deficiência da 21-hidroxilase com os normais. Assim, a dosagem destes esteróides näo contribui de modo definitivo para o diagnóstcio de defeitos de síntese adrenal ou de anencefalia. Também näo permitem definir com segurança o sexo fetal

Production of anti-HBsAg monoclonal antibodies

The production of monnoclonal antibodies against the HBsAg is reported. Balb/c mice immunized against a commercial vaccine were used. Upon fusion of spleen cells from an animal having a high titer with the SP2/0 myeloma cell line, we obtained 6 stable cell lines, all of the IgG1 subclass. They showed a wide range of specificities against the classical HBsAg subtypes. These monoclonal antibodies can be used as the basis for the development of new methods for the screening and study of the hepatitis B virus

Monoclonal antibodies to bovine parathyroid hormone: production and characterization

1. This paper describes the production and characterization of monoclonal monoclonal antibodies against bovine parathyroid hormone (bPTH) - (1-84). 2. Spleen cells from A/J mice successfully immunized with bPTH-(1-84) were fused with SP2/O myeloma cells using PEG 4000 as fusogen. The screening method employed microtiter plates coated with sheep antimouse IgG and the presence of specific monoclonal antibodies was demonstrated by the binding of 125I-bPTH-(1-84). 3. A delailed study of the specificity of the three viable monoclonals with highest affinity showed that two (6FH6 and 6CD4) were amino-terminal specific and the other (5BG9) carboxyl-terminal specific. The two amino-terminal monoclonal antibodies appear to recognize the same antigenic site. 4. The monoclonal antibodies produced are potentially useful reagents for the development of new methods for the measurement of PTH in biological fluids, studies on the interaction of PTH with its receptor, as well as localization of PTH producing cells

Dosagem dos andrógenos em mulheres hirsutas: valor diagnóstico e resposta à depressäo com dexametasona / Determination of androgens in hirsute females: diagnosis value and response to depression with dexamethasome

Foram estudadas 30 mulheres hirsutas no sentido de avaliar os valores dos andrógenos basais e após teste dinâmico de supressäo com dexametasona. Os andrógenos dosados (RIE) foram testosterona, androstenediona e sulfato de dehidroepiandrosterona. Do ponto de vista clínico, 73% das pacientes apresentavam hirsutismo de início entre os 12 e 20 anos; 93% com hirsutismo de leve a moderado; as alteraçöes menstruais mais freqüentes, a espaniomenorréia (60%) e 50% apresentavam infertilidade primária. 90% das pacientes apresentavam valores de T acima da normalidade, sendo este andrógeno o mais freqüentemente alterado. Apenas duas pacientes apresentaram todos os andrógenos dosados dentro da normalidade; uma paciente com valor somente de DEA-S alterado; uma paciente com o valor somente de A alterado; em 12 pacientes somente o valor de T alterado e 14 com valor de T e A acima da normalidade. Em relaçäo ao teste de supressäo com dexametasona, verificamos que 16 pacientes apresentavam hiperandrogenismo do tipo dependente de ACTH, cinco de origem independente de ACTH e sete do tipo misto. Pudemos também observar que näo houve associaçäo entre os valores mais altos da T basais com quadro clínico de hirsutismo mais severo e/ou a presença de maiores alteraçöes menstruais

Comparaçäo entre os métodos de cromatografia de troca iônica e cromatografia de afinidade para a dosagem de hemoglobina glicolisada (HbA1) / Comparison between ion exchange chromatography and affinity chromatography methods for the measurement of the glycosylated hemoglobin (bA1)

O método de cromatografia de afinidade para a dosagem de hemoglobina foi comparado com o método de cromatografia de troca iônica em minicolunas. Os resultados obtidos em indivíduos normais e pacientes diabéticos pelos dois procedimentos tiveram uma alta correlaçäo (r = 0,91), mas os valores obtidos foram mais baixos pelo ensaio de afinidade. As concentraçöes aparentes de HbA1 pelo método de troca iônica estiveram acima do normal nos pacientes urêmicos e nos homozigotos para anemia falciforme. Todavia, nestes estados com baixa sobrevida dos eritrócitos as concentraçöes de HbA1 pela cromatografia de afinidade estiveram normais ou abaixo do normal. O método de cromatografia de afinidade parece ser mais específico do que o método de troca iônica na medida da hemoglobina glicosilada

Técnicas de dosagem do cortisol plasmático e salivar em nefropatas crônicos em programa de hemodiálise / Dosage technics of plasma and salivary cortisol in patients with chronic nephropathies in hemodialysis program

Nos portadores de insuficiência renal crônica, os metabólitos do cortisol elevam-se consideravelmente na circulaçäo e podem interferir na sua determinaçäo, prejudicando a avaliaçäo da funçäo do eixo hipotálamo-hipofísio-adrenocortical. Em 21 pacientes submetidos a programa crônico de hemodiálise, o cortisol foi dosado no plasma e na saliva, antes e após estímulo e supressäo adrenal. Todas as amostras foram dosadas após 4 ensaios laboratoriais preparatórios: 1) método direto (rotineiramente utilizado em nossos laboratórios); 2) após extraçäo com diclorometano; 3) após hidrólise enzimática; e 4) após hidrólise e extraçäo. Os valores obtidos pelo método da extraçäo, em todas as amostras de plasma ou saliva, revelaram-se compatíveis com a faixa observada em indivíduos normais, enquanto os demais prodedimentos forneceram valores mais elevados. A dosagem do cortisol na saliva mostrou valores paralelos aos plasmáticos (e semelhantes aos valores do cortisol livre plasmático), podendo se constituir alternativa simples, menos espoliante e näo invasiva para a avaliaçäo destes pacientes. Verificou-se, também, que a dinâmica de secreçäo adrenal foi normal nos pacientes estudados, obtendo-se valores normais e consistentes quando realizada a extraçäo prévia das amostras

Prenatal diagnosis of congenital adrenal hyperplasia due to 21-hydroxylase deficiency

Documentamos uma gravidez de alto risco para Hiperplasia Adrenal Congênita através das determinaçöes dos níveis hormonais de 17-hidroxiprogesterona e androstenodiona em amostras de líquido amniótico colhidas na 16ª e 37ª semanas da gestaçäo. As mesmas determinaçöes foram executadas em amostras de sangue materno e do cordäo umbilical. Foi estabelecido o diagnóstico da Hiperplasia Adrenal Congênita em um feto feminino com cariótipo normal 46,XX. Tal diagnóstico foi confirmado no recém-nascido. A experiência acumulada com este procedimento propedêutico permitirá estabelecer bases sólidas para a conveniente assistência genético-clínica aos casais heterozigotos para o gene da HAC, inclusive com a prevençäo da virilizaçäo de fetos femininos afetados

Padronizaçäo das concentraçöes de esteróides no líquido amniótico: I. 17 alpha-hidroxiprogesterona e androstenediona / Standardization of steroid concentrations in the amniotic fluid: I. 17 alpha-hydroxyprogesterone and androstenedione

A funçäo adrenal fetal pode ser avaliada pelo estudo das concentraçöes de 17alfa-OHP e androstenediona no líquido amniótico (LA). Estudamos LAs de 38 gestaçöes, obtidos por amniocentese no 2§ trimestre. Trinta e três destas gestaçöes resultaram em fetos normais, 3 foram anencéfalos e um portador de hiperplasia adrenal congênita por deficiência de 21-OH. Uma segunda gestaçäo de risco para deficiência da 21-OH, ainda em curso, apresentou valores normais de 17alfa-OHP e androstenediona. Os esteróides foram dosados conforme radioimunoensaio previamente descritos para dosagens séricas. Valores médios + ou - DP no LA de gestaçöes com fetos normais foram semelhantes àqueles previamente obtidos no soro: 17alfa-OHP = 218 + ou - 106ng/dl e androstenediona = 75 + ou - 50ng/dl enquanto que, na gestaçäo com feto portador de HAC, os valores foram extremamente elevados: 2.300ng/dl e 1.300ng/dl, respectivamente. Nos fetos anencéfalos, apenas androstenediona foi significativamente mais baixa (45 + ou - 13ng/dl, p < 0,02). Estes achados tornam possível o diagnóstico intra-útero de defeitos de síntese adrenal, especialmente da deficiência da 21-OH, abrindo a possibilidade de tratamento do nascimento

Imuno-histoquímica hipofisária: metodologia e aplicaçäo / Immunohistochemistry of the pituitary gland: methodology and use

Os autores estudaram a aplicaçäo do método da peroxidase-antiperoxidase para detectar hormônio de crescimento (GH), prolactina (PRL) e corticotrofina (ACTH) em cortes de tecidos normais e de pituitária adenomatosa utilizando anticorpos de radioimunoensaio (RIA). Quatro glândulas pituitárias normais obtidas em autópsia e 21 adenomas pituitárias normais obtidos durante cirurgia de pacientes com acromegalia (16), hiperprolactinemia (2) e doença de Cushing (3) foram estudados. Anti-soros obtidos de carneiros imunizados com preparaçöes altamente purificadas de GH humano, prolactina ovina e ACTH porcino. Reatividades cruzadas de anti-GH com PRL, anti-PRL com GH e anti-ACTH 1-39 com ACTH 1-24 e ACTH 18-39 no RIA foram: 0,6%, 0,03%, 3,1% e 5,7% respectivamente. Detecçäo de cada hormônio foi bem sucedida em todos os cortes estudados de tecido pituitário normal. Melhores colaboraçöes foram obtidas usando diluiçöes primárias do anti-soro mais baixas que aquela rotineiramente empregadas em RIA. Anti-GH mostrou näo ter reatividade cruzada significante com PRL em cortes de tecido pituitário. Anti-PRL, contudo, mostrou alguma reatividade cruzada com GH, mas isto pôde ser evitado por absorçäo prévia do anti-soro com GH. Nenhuma diferença na coloraçäo pôde ser detectada fosse usado ou näo o anti-ACTH depois da imuno-absorçäo com ACTH 1-24. Todos os adenomas pituitários de pacientes acromegálicos mostraram células imunorreativas para GH, porém poucos adenomas tiveram todas ou mesmo a maioria das células positivas para GH. Todos os adenomas obtidos de pacientes com hiperprolactinemia e doença de Cushing coraram-se com anti-soro contra PRL e ACTH, respectivamente. Estes resultados validam o uso dos anti-soros mencionados na imuno-histoquímica da pituitária

Utilidade das dosagens radioimunológicas amino e carboxi-terminal específicas do paratormônio (hPTH) no diagnóstico diferencial das hipercalcemias / Utility of radioimmunoassay determinations of the amino and carboxyl-terminal specific of parathormone (hPTH) in differential diagnosis of hypercalcemia

Dois métodos de radioimunoensaio de hPTH, um amino e outro carboxi-terminal específico, foram comparados quanto à sua utilidade no diagnóstico diferencial das hipercalcemias. Para tal foram estudados os resultados obtidos em 20 pacientes com hipercalcemia, sendo 14 com hiperparatiroidismo primário (HPP) e 6 com hipercalcemia näo relacionada a HPP (nHPP), dos quais 3 tinham carcinoma, 2 intoxicaçäo por lítio e 1 sarcoidose. Os resultados obtidos com o ensaio amino-terminal mostraram níveis indetectáveis nos 6 pacientes com hipercalcemia nHPP, enquanto os pacientes com HPP tinham todos valores detectáveis, sendo elevados em 10. Já o ensaio carboxi-terminal específico mostrou valores detectáveis em 4 dos 6 pacientes com hipercalcemia nHPP, sendo elevados em 3 deles, enquanto que nos pacientes com HPP os resultados foram equivalentes aos obtidos no ensaio amino-terminal. Conclui-se que no diagnóstico diferencial das hipercalcemias o ensaio amino-terminal específico de hPTH apresenta maior utilidade

Estudo do valor do teste rápido de supressäo com dexametasona na triagem de pacientes suspeitos de síndrome de Cushing / Value of rapid suppresion test with dexamethasone in the selection of patients suspected of having Cushing's syndrome

Os autores estudaram o valor do teste rápido de supressäo com dexametasona (1mg V.O. às 23 horas, com dosagem de cortisol sérico às 8 horas do dia seguinte) na triagem de 169 pacientes com suspeita de síndrome de Cushing, dos quais 20 eram comprovadamente portadores da síndrome. Para a definiçäo do valor crítico de cortisol pós-depressäo foram analisados os critérios de sensibilidade, especificidade e valores preditivos positivo e negativo. Fixando-se esse nível em <= 6ug?d1, obtiveram especificidade de 94,6%, sensibilidade de 100%, valor preditivo positivo de 71,4% e valor preditivo negativo de 100%. Os autores concluem que, nessas condiçöes, o teste em estudo é o mais prático e confiável para uso na triagem de pacientes com suspeita de síndrome de Cushing